色譜常見問題問答

問：用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化,，原因何在?如何解決?

答：關于漂移問題：?

1,、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置,，保持柱溫恒定

2,、流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā),、反應等

3,、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡

關于快速變化問題?

1,、流速發(fā)生變化,，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩(wěn)定

2,、泵中有氣泡,，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

3,、流動相不合適,，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合

問：色質聯(lián)用中毛細柱的選擇應注意什么問題?

答：1、柱效要高

2,、熱穩(wěn)定性好 

3,、化學惰性強

具體選擇應注意：

1、柱極性,。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析

2,、柱子內徑。內徑大小決定柱容量

3,、液膜厚度,。分析樣品溫度一不一樣，對膜厚有不同要求,，溫度高液膜要厚,，溫度低液膜要薄 

4、柱長度,。柱越長,，柱效越高，分離效果越好,，但也存在吸附問題,，柱子過長,，分析時間長，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長度

5,、外涂層(柱體)的選擇

6,、另外還有儀器型號、分析對象等因素

問：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?

答：1,、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子,，替換篩板或更換柱子,。

2、存在干擾峰,，解決辦法為使用較長的柱子,，改換流動相或更換選擇性好的柱子

問：從那些方面可以簡單判別毛細管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?

答：1、分配容量(或容量因子)K,，好的柱子在高溫運行后,，分配容量K不應有明顯的下降，否則,，說明柱子的熱穩(wěn)定性不好,。

2、理論塔板數(shù)n,，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后,，理論塔板數(shù)應基本保持恒定

3、柱子的極性,。熱穩(wěn)定性好的柱子,，高溫前后極性變化不大，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒有大的變化,。

4,、噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后,，噪聲不能增加.

5,、柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內部一般要用去活性試劑去活以增加惰性,。質量好的毛細管柱子高溫后,，去活層不應該變化，表現(xiàn)在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加,。

問：為什么進樣器內的玻璃襯套會對色譜行為造成影響?

答：進樣器內的玻璃襯套主要有下列作用：

1,、提供一個溫度均勻的汽化室，防止局部過熱,。

2,、玻璃的惰性不如不銹鋼好,，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。

3,、易于拆換清洗 ,，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會逐漸積累殘存于汽化室,，高溫下會慢慢分解,，使基流增加，噪聲增大,，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響,。

4、可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內徑適宜的玻璃襯套,，以改變汽化室的體積,，而不用更換整個進樣加熱塊。從以上幾個方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因,。

問：毛細管色譜分流進樣時,，非線性分流的主要原因是什么?

答：1、進樣器溫度太低,，樣品汽化不完全,，發(fā)生分級分流。

2,、進樣器溫度太高,，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解,，或樣品部分地被吸附在進樣器內表面上,。

3、在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分,。

4,、系統(tǒng)的進樣墊，柱接頭等地方漏氣,。
     

問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

答：1,、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量

2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學性質改變流動相或柱子

3,、樣品與檢測器不匹配：根據(jù)樣品化學性質調整波長或改換檢測器

4,、檢測器衰減太多：調整衰減即可。

5,、檢測器時間常數(shù)太大：解決辦法為降低時間參數(shù)

6,、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。

7,、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣,。

8,、記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可。

9,、流動相流量不合適：調整流速即可,。

10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,，重作校正曲線,。

問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定,，原因何在?如何解決?

答：原因可能有：?

1,、泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣,，對溶劑進行脫氣處理；

2,、比例閥失效,，更換比例閥即可。

3,、泵密封墊損壞,，更換密封墊即可。

4,、溶劑中的氣泡,，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法,；

5,、系統(tǒng)檢漏，找出漏點,，密封即可,。

6、梯度洗脫,，這時壓力波動是正常的,。

問：做PGS／MS分析時，如何防止焦油狀污染物進入毛細柱?

答：聚合物,，尤其是一些含氮,、硫及鹵素的高分子裂解時，常有焦油狀物質產(chǎn)生,。為防止這種焦油狀物質進入毛細柱造成污染而使柱性能下降,，可采用保護預柱，即在裂解器與毛細柱之間接一填充預柱,，通過控制預柱溫度而使焦油狀物質滯留在預柱內,，預注可置于GC氣化室內,，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積,，當然,，預柱填料需經(jīng)常更換。

問：我最近更換了另一種牌號的ODS柱,，雖然分離情況仍可以,，但保留時間不能重現(xiàn)，為什么?

答：這是因為被分析物可能具有形成氫健的能力,。盡管過去幾年來,，填料的制造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同,。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用,。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同,。在流動相中加入少量競爭物,，如三乙基胺(TEA)，將會使硅醇基的成鍵能力飽和,，從而保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現(xiàn)性,。

問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么?

答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題,。其原因有多方面,，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因,。

1,、拆去保護柱，看柱壓是否還高,，否則是保護柱的問題,，若柱壓仍高，再檢查,；

2,、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降,，否則是管路堵塞,，需清洗，若壓力下降,，再檢查,。

3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,，(此時不要連接檢測器,，以防固體顆粒進入流動性)。這時,，如果柱壓仍不下降,，再檢查；

4,、更換柱子入口篩板,，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質,，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升,。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系,。一般情況下,，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇,。

問：高溫毛細柱的使用壽命一般為多長?

答：毛細柱壽命除決定于柱子本身的性能外,，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度,、樣品狀態(tài)，進樣量等,，如果在其使用溫度范圍內,，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下,，柱子壽命一般在2—3年之間,。

問：如毛細管柱被污染，柱效和分辨率降低,，有何方法使它恢復?是否可通過老化來解決?

答：根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來解決,，如果污染不嚴重，污染物沸點不是太高,，可通過老化來解決,，但老化溫度不可超過柱子的最高使用溫度，且一般要較長時間(8—30小時),，如果污染較嚴重,，或通過老化仍不能使柱性能恢復，那就必須采用溶劑清洗,，通常是用5倍柱容積的溶劑(如正戊烷,，二氯甲烷等)通過色譜柱。

當然，清洗溶劑用的越多,，對柱性能的損壞越大,，清洗完后，在通載氣老化一定時間,，如果柱性能恢復,，便可繼續(xù)使用。

必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗,，對于非交聯(lián)柱,，清洗柱會徹底失效，因為固定液被洗掉了,，至于清洗用溶劑的選擇,，可參考說明書。