近日,，通訊作者說：“在結(jié)構(gòu)生物學界,，科學家們使用X射線晶體學和低溫電子顯微鏡等技術(shù)來了解蛋白質(zhì)的精確結(jié)構(gòu)并推斷其功能，但我們不了解它們在細胞中的功能,?！?NSLS-II科學家麗莎·米勒(Lisa Miller)說：“如果您正在研究一種特定的疾病，則需要知道某種蛋白質(zhì)是否在錯誤的位置起作用或根本不起作用?！?/p>
由美國國家能源部布魯克海文國家實驗室的美國能源部(DOE)科學用戶設(shè)施辦公室國家同步加速器光源II(NSLS-II)的研究人員組成的科學家團隊展示了一種對3-D蛋白質(zhì)成像的新技術(shù),。具有納米級的分辨率。
他們的工作發(fā)表在《美國化學學會雜志》上,，使研究人員能夠識別蛋白質(zhì)在單個細胞內(nèi)的精確位置,，從而達到細胞膜和最小的亞細胞器的分辨率。
米勒和她的同事開發(fā)的這項新技術(shù)的特點與生物學中傳統(tǒng)的熒光顯微鏡方法類似,，在這種方法中,，一種稱為綠色熒光蛋白(GFP)的分子可以與其他蛋白連接以顯示其位置。GFP暴露于紫外線或可見光時,，會發(fā)出亮綠色的熒光,，照亮細胞中其他“不可見”的蛋白質(zhì)。
米勒說：“使用GFP,，我們可以看到一種蛋白質(zhì)是否在大小為數(shù)百納米的亞細胞結(jié)構(gòu)中,，如細胞核或細胞質(zhì)種。但是,，這種結(jié)構(gòu)像細胞膜一樣,，只有七到十納米的大小。使用GFP這樣的可見光標簽很難看到,。要看到細胞中10納米大小的結(jié)構(gòu),，您將需要使用X射線?！睘榱丝朔@一挑戰(zhàn),，NSLS-II的研究人員與麻省理工學院(MIT)和波士頓大學(BU)的科學家合作，他們開發(fā)了一種對X射線敏感的標記,，稱為鑭系元素結(jié)合標記(LBT),。LBT是非常小的蛋白質(zhì)，可以與鑭系元素(如鉺和銪)緊密結(jié)合,。
NSLS-II的主要研究人員蒂芙尼·維克多(Tiffany Victor)說：“與GFP暴露于紫外線或可見光時會發(fā)熒光的鑭不同,，鑭系元素在X射線的存在下發(fā)熒光。而且由于鑭系元素并非天然存在于細胞中,，所以當我們用X射線顯微鏡觀察時,，我們就知道了我們感興趣的蛋白質(zhì)的位置?！盢SLS-II,，MIT和BU的研究人員共同努力，將LBT技術(shù)與X射線熒光技術(shù)相結(jié)合,。米勒說：“盡管近十年來LBT已被廣泛使用,，但從未將它們用于X射線熒光研究,。”
除了獲得更高分辨率的圖像外,，X射線熒光還可以同時提供細胞中所有微量元素(例如鈣,、鉀、鐵,、銅和鋅)的化學圖像,。在其他研究中，米勒的團隊正在研究銅等微量元素與阿爾茨海默氏病等疾病中神經(jīng)元死亡的聯(lián)系,?？梢暬@些元素相對于特定蛋白質(zhì)的位置將是新發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵。除了與X射線兼容之外,，與可見光標記相比,，LBT還具有相對較小的尺寸。
米勒說：“想象一下,，你有一個跟你身體一樣大甚至更大的尾巴附著在你身體上,。您將無法進行很多正常的活動。但是,，如果您只需要用一根小豬的尾巴四處走動,，您仍然可以奔跑，跳躍和穿過門口,。GFP就像大尾巴-可能確實阻礙了許多蛋白質(zhì)的功能,。但是這些小的鑭系元素結(jié)合標記幾乎是看不見的?！?/p>
為了證明LBT用于以納米級分辨率對3-D蛋白質(zhì)成像的用途,，MIT和BU的研究人員標記了細菌細胞中的兩種蛋白質(zhì) - 一種胞質(zhì)蛋白質(zhì)和一種膜蛋白質(zhì)。然后,，米勒的小組在NSLS-II的硬X射線納米探針(HXN)光束線和高級光子源(APS)的Bionanoprobe光束線上研究了樣品,。
HXN首席束線科學家Chu Yong表示：“ HXN提供了世界領(lǐng)先的X射線焦點尺寸，可縮小至約12納米,。這對于以3D分辨率對細菌細胞成像至關(guān)重要,。我們還開發(fā)了一種將細胞安裝在專門的樣品架上的新方法，以優(yōu)化測量效率,。”
通過將HXN的無與倫比的分辨率與LBT的功能相結(jié)合,，該團隊能夠?qū)蓚€標記的蛋白質(zhì)進行成像,。可視化細胞膜蛋白證明了可以在高分辨率下觀察到LBT,，而對細胞質(zhì)蛋白成像顯示LBT也可以在細胞內(nèi)可視化,。維克多說：“在高濃度下，鑭系元素對細胞有毒，因此對我們來說,，重要的是要證明我們可以用非常低的鑭系元素濃度處理細胞,，而該濃度無毒且足以使其穿過細胞膜使我們看到想要的蛋白質(zhì)圖像?！?/p>
如今,， 借助這項新技術(shù)的成功應用，科學家希望能夠使用LBT以10納米的分辨率成像細胞內(nèi)的其他蛋白質(zhì),。