金標(biāo)免疫層析技術(shù)是一種將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和層析技術(shù)等多種技術(shù)結(jié)合在一起的固相標(biāo)記免疫技術(shù),，因其操作簡便,、快速，且具有很高的異性和敏感性,，已廣泛應(yīng)用于人絨毛膜促性腺激素（HCG）,、鼠疫、乙肝,、寄生蟲,、艾滋病等臨床檢測中[1]。金標(biāo)免疫試紙條檢測目前主要停留在定性判斷,，應(yīng)用范圍受到很大限制,。定性判斷容易受人為因素的干擾，且靈敏度低,，可能出現(xiàn)“假陽性”與“假陰性”,，而且在臨床上不能建立該待檢指標(biāo)的動態(tài)過程[2-3]。因此,，研究試紙條的定量測試儀器具有重要意義,。

    國內(nèi)外學(xué)者對膠體金試紙條的定量測試進行了一系列研究，光電檢測技術(shù)是普遍采用的檢測方案,，但是信號的接收部分存在多種設(shè)計方案,，各有優(yōu)弊。采用光敏電阻測量方案,，電路簡單,、測量光強范圍廣，但是光敏電阻在測量中存在嚴(yán)重的阻值漂移,，影響測量精度,；采用CCD、CMOS等圖像傳感器測量顯色區(qū)域，雖然避免了設(shè)計機械掃描機構(gòu),，但是后期對圖像的分析處理同樣復(fù)雜,，而且這種方案成本較高，難以在市場上推廣,。本文設(shè)計的儀器采用綠光LED作為發(fā)射光源,，以光電二極管接收試紙條反射光，并通過步進電機帶動檢測系統(tǒng)掃描試紙條待檢區(qū)域,，從而快速,、準(zhǔn)確讀取膠體金試紙條檢測結(jié)果。但由于檢測系統(tǒng)不可能處于完全黑暗的環(huán)境,，必然會受到環(huán)境的噪聲干擾,。對此，本儀器還通過控制光源信號的調(diào)制及接收信號的解調(diào)過程,，使光電傳感器只對特定頻率光信號敏感,，從而消除了光譜的背景光及環(huán)境電磁干擾，提高了儀器系統(tǒng)檢測精度,。
1 金標(biāo)免疫試紙條定量檢測原理
    金標(biāo)免疫層析技術(shù)原理是：將特異性抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶,，當(dāng)干燥的硝酸纖維素膜一端滴入樣品（可取血、尿,、唾液）后,，由于滲透作用，樣品沿著纖維膜移動,，當(dāng)移動到固定有抗體的區(qū)域時,，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合，發(fā)生顯色,。纖維素膜上一般有兩條線：檢測線（簡稱T線）和對照線（簡稱C線）,。結(jié)果判定：如果檢測線和對照線均顯色，則為陽性,，表明樣品中含有待檢物,；如果僅對照線上顯色而檢測線未顯色，則為陰性結(jié)果,，即未檢測到目標(biāo)物質(zhì),；如果對照線上未顯色，則無論檢測線上是否顯色,，都認(rèn)為此次檢測失敗,。如果樣品中含有待檢物，則檢測線會顯色,，而且樣品中目標(biāo)待測物的含量越高，顯色會越深[1，4],。
    根據(jù)吸光度原理,，物體顏色的深淺和光的吸收與反射有關(guān)。顏色越深,，則對光的吸收越強,，反射的光強就越弱。因此,，目標(biāo)待測物的濃度和檢測帶的反射光強呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,。在待檢物一定濃度內(nèi)，可認(rèn)為反射光強與其濃度成線性關(guān)系,?；谝陨显恚ㄟ^適當(dāng)?shù)墓怆姍z測方法測量出反射光強,，就可計算出目標(biāo)待測物的濃度[3-5],。
2 系統(tǒng)設(shè)計
    金標(biāo)免疫試紙條分析儀主要由機械掃描模塊、光路模塊,、電路控制模塊,、輸入輸出模塊組成，如圖1所示,。電路控制模塊控制LED光源發(fā)出中頻光信號照射到試紙條上,，然后驅(qū)動步進電機移動，以帶動機械掃描模塊移動,。光電二極管接收掃描得到的試紙條上反射的光信號并將其轉(zhuǎn)換成電信號后送入電路控制模塊進行處理,。該系統(tǒng)外擴微型打印機、LCD,、SD卡等輸出設(shè)備,，處理后得到的檢測結(jié)果可被即時打印出來或者由LCD顯示，也可存儲到SD卡,，供后期海量數(shù)據(jù)的分析,、比對使用。

2.1 系統(tǒng)光路設(shè)計及機械結(jié)構(gòu)
    金標(biāo)免疫試紙條上顯色物質(zhì)為納米金顆粒,，其聚集形成暗紅色條帶,，對綠光的吸收最強烈。為了增加光強,，本系統(tǒng)中對稱安裝一對高穩(wěn)定性的強光綠色LED作為照明光源,，其波長約為520 nm，接收部分使用高靈敏度的光電二極管,。光路模塊結(jié)構(gòu)如圖2所示,，掃描系統(tǒng)機械圖如圖3所示,。

    從圖2和圖3可以看出，LED光源和光電二極管組成光路系統(tǒng),。光路系統(tǒng)固定在封閉暗箱內(nèi),，并可以隨步進電機沿著導(dǎo)軌滑動，實現(xiàn)對試紙條檢測區(qū)域的掃描,。掃描一次的步程為11.5 mm,，時間為8 s。
2.2 系統(tǒng)電路設(shè)計
    電路設(shè)計是本系統(tǒng)設(shè)計的重點,。對試紙條的掃描檢測不可能在完全封閉,、不透光的環(huán)境中進行，因此,，光電傳感器接收的反射光信號中必然混雜著環(huán)境光線等一系列噪聲信號的干擾,。如何從強干擾噪聲中提取出有效反射光信號是本次設(shè)計中的關(guān)鍵技術(shù)。
    干擾噪聲和有效反射光信號在測量中一直混雜著,，很難從時域上區(qū)分,，故考慮從頻域上去噪。干擾噪聲處于低頻段,，而系統(tǒng)需要采集的反射光信號是與光源一致(即可調(diào))的,。所以可將綠光LED光源調(diào)制到中頻段，即可產(chǎn)生中頻段的反射光信號,，再通過濾波,、解調(diào)即可得到去除噪聲的有效光電信號[6]。
    如圖4所示,，使用交流調(diào)制驅(qū)動LED,，使LED發(fā)出的綠光處于2 kHz的中頻波段。試紙條反射的光信號通過光電二極管接收后轉(zhuǎn)為電流信號,，電流信號通過精密I/V轉(zhuǎn)換電路后變成電壓信號,。此電壓信號經(jīng)過帶通濾波后，實現(xiàn)與干擾噪聲的分離,，然后進行放大,，得到交流待檢信號Signal_AC。Signal_AC 的幅值表征反射光的光強,，但此信號無法直接送入A/D轉(zhuǎn)換器得到幅值,，還需要恰當(dāng)?shù)臋z波電路實現(xiàn)信號解調(diào)，經(jīng)過檢波電路后的信號如圖4中Signal_AD,。系統(tǒng)采用的A/D轉(zhuǎn)換器具有數(shù)字低通濾波器的功能,，相當(dāng)于將信號積分平均處理。如此,，Signal_AD最終轉(zhuǎn)化成直流信號,，再進行采樣送入單片機處理,。

3 實驗結(jié)果及分析
    實驗樣品如圖5所示，每張試紙條中有兩條紅線,，其中上面一條顏色較深,，為C線,，起對照作用,；下面一條顏色較淺的為T線，T線顏色深淺即表征樣品的濃度大小,。配置T/C深淺比值分別為100%,、50%、30%,、10%,、5%的5個試紙條進行掃描測試。

    掃描檢測的結(jié)果如圖6所示,。每條試紙條掃描后的波形有兩個波谷,，表征兩條色帶對光源的兩個吸收峰。為了準(zhǔn)確獲取曲線上的T值,、C值,，采用面積積分法，即分別求取兩個波谷面積T_Area,、C_Area,，然后求取波谷相對面積比T/C。從圖中可以看出,，5份樣品中對照線,、檢測線均被檢出，檢測結(jié)果分別為100%,、49.2%,、29.6%、10.6%,、4.5%,。每份樣品檢出值與實際值誤差均小于1%。對2號,、5號樣品分別掃描檢測10次,，結(jié)果如圖7所示。2號樣品均值為4.49%,，變異系數(shù)為1.15%,；5號樣品均值為49.5%，變異系數(shù)為0.5%,?？梢?，該系統(tǒng)檢測結(jié)果穩(wěn)定性很高，變異系數(shù)小于2%,。

    基于光電檢測技術(shù)成功研制了一套金標(biāo)免疫試條分析儀,。系統(tǒng)通過對光源信號的調(diào)制及對接收信號的解調(diào)技術(shù)，成功去除了干擾噪聲,，提高了儀器檢測精度,。使用標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)試紙條進行實驗，檢測結(jié)果與實際值非常接近,，誤差小于1%,；樣品的重復(fù)性實驗變異系數(shù)均低于2%，表明該儀器測量結(jié)果穩(wěn)定性高,，抗干擾能力強,。本儀器在金標(biāo)試紙條的快速、定量檢測中有廣闊的應(yīng)用前景,。
參考文獻(xiàn)
[1] KIM S,，PARK J K.Development of a test strip reader for a lateral flow membrane-based immunochromatographic assay[J].Biotechnology and Bioprocess Engineering，2004(9)：127-131.
[2] Qiu Xianbo,，Liu Changchun,，MICHAEL G.A portable analyzer for pouch-actuated,immunoassay cassettes[J].Sensors and Actuators B：Chemical，2011,，160(1)：1529-1535.
[3] 黃立華,，曾愛軍，張友寶,，等.金標(biāo)免疫試紙條反射式光度計的研制[J].儀器儀表學(xué)報,，2009，30(3)：663-667.
[4] 杜民.基于光電檢測與信息處理技術(shù)的納米金免疫層析試條定量測試的研究[D].福州：福州大學(xué),，2005.
[5] 張友全,，楊成文，陳峰,，等.一種新型便攜式甲霜靈膠體金試紙條顯色分析儀的研制[J].儀器儀表學(xué)報,，2009，30(10)：2175-2179.
[6] 潘軼,，葉樹明,，楊俊毅，等.基于偽隨機序列調(diào)制的熒光測量系統(tǒng)[J].儀器儀表學(xué)報,，2011,，32(7)：1470-1477.